I. MỤC ĐÍCH

Mô tả quy trình cho nhân viên khoa Vi sinh về cách cấy phân vùng để có thể tách khuẩn lạc riêng rẽ.

II. PHẠM VI ÁP DỤNG

Quy trình này áp dụng để cho mọi nhân viên khoa Vi sinh, Bệnh viện đa khoa tỉnh Quảng Ninh.

III. TÀI LIỆU VIỆN DẪN

Diagnostic Microbiology – 4th Edition – Washington, Philadelphia

Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology – 9th Edition – William & Wilkins

Manual of Clinical Microbiology – 8th Edition- Washington DC- Patrick R.Murray.

IV. TRÁCH NHIỆM

Nhân viên xét nghiệm khoa vi sinh- Bệnh viện đa khoa tỉnh Quảng Ninh có trách nhiệm thực hiện theo đúng quy trình

Người thực hiện: cán bộ xét nghiệm đã được đào tạo và có chứng chỉ hoặc chứng nhận về chuyên nghành vi sinh, làm việc tại khoa Vi sinh- Bệnh viện đa khoa tỉnh Quảng Ninh

V.ĐỊNH NGHĨA, THUẬT NGỮ, CHỮ VIẾT TẮT

Giải thích thuật ngữ:

Không áp dụng

Từ viết tắt:

SOP       =          Quy trình chuẩn (Standard of Procedure)

KXN      =          Khoa Xét nghiệm

VI. NGUYÊN LÝ

Để càng về phía cuối của đường cấy, mật độ vi khuẩn càng giảm; càng vùng cấy sau mật độ vi khuẩn càng giảm. Dựa vào điều này người ta cấy nhiều vùng tiếp nhau để tách được những khuẩn lạc riêng rẽ.

VII. TRANG THIẾT BỊ VÀ VẬT TƯ

 Thiết bị

Tủ an toàn sinh học

Tủ ấm thường

Tủ ấm CO2

 Dụng cụ

Đèn cồn

Que cấy

Hóa chất, thuốc thử

Các môi trường nuôi cấy phù hợp với từng loại bệnh phẩm

VIII. NỘI DUNG

Bệnh phẩm sử dụng

Tất cả các bệnh phẩm vi sinh cần cấy khuẩn lạc riêng rẽ: đờm, dịch họng, mủ, phân….

Bệnh phẩm phải có đầy đủ thông tin, lọ đựng bệnh phẩm có nắp đậy chặt

Kỹ thuật tiến hành

Đốt que cấy trên ngọn đèn  cồn

Để que cấy nguội, lấy đầy một ăng bệnh phẩm, ria vào một góc lên mặt thạch với mật độ dày, vùng đó gọi là vùng nguyên uỷ. Từ vùng nguyên uỷ kéo một đường thẳng sang vùng khác;

- Đốt que cấy, để nguội, chạm đầu que cấy lên đường thẳng kia và ria thưa dần lên mặt thạch vào vùng thứ hai (mặt thạch được chia 3 vùng) và kéo một đường thẳng sang vùng thứ 3;

- Đốt que cấy, để nguội, chạm đầu que cấy lên đường thẳng đó và ria thưa dần lên mặt thạch ở vùng thứ ba;

- Như  vậy sẽ tạo thành 3 vùng cấy, phương pháp này cho phép tách biệt được các khuẩn lạc;

- Cũng có thể cấy 4 vùng nếu xoay đĩa thạch góc 900.

IX. DIỄN GIẢI KẾT QUẢ

- Không tách được khuẩn lạc riêng rẽ do mật độ vi khuẩn quá dày hoặc do đốt ăng không kĩ hoặc đường tiếp nối của vùng cấy sau với vùng cấy trước quá nhiều: cần cấy lại;

- Tách được khuẩn lạc riêng rẽ nhưng không tách được khuẩn lạc cần phân lập: cần cấy lại;

-      Tách được khuẩn lạc cần phân lập: cấy phân vùng thành công

X. KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG

Đảm bảo không bị lây nhiễm

Đảm bảo có khuẩn lạc riêng rẽ.

XI. AN TOÀN

Phải sử dụng bảo hộ cá nhân đầy đủ;

Các kỹ thuật phải được tiến hành trong tủ an toàn sinh học.

XII. HỒ SƠ LƯU

-Cấy phân vùng có để cấy phân lập từ bệnh phẩm nhưng cũng có thể được dùng để tách khuẩn lạc riêng rẽ trong trường hợp các loại khuẩn lạc lẫn vào nhau;

- Đối với những khuẩn lạc lẫn với khuẩn lạc của Proteus hoặc chi Pseudomonacó tính chất lan thì phải phân lập trên môi trường Uri hoặc Chromatic detection.

XIII. TÀI LIỆU LIÊN QUAN

Không áp dụng